Fluorescencyjny Ilościowy PCR

Bracie, odwrotna transkrypcja zakończona, wreszcie ostatni krok - fluorescencyjny ilościowy PCR!Hej, bracie, co to jest ilościowy PCR w czasie rzeczywistym?

PCR zawsze wiesz, prawda?

Wiesz, PCR to reakcja łańcuchowa polimerazy i jest to technologia zwiększająca DNA!

To prawie... Jest to techniczna metoda amplifikacji sekwencji docelowej ponad milion razy przez specyficzne startery, ale to tylko wskazuje na obecność lub brak sekwencji docelowej i nie może określić ilości początkowej matrycy.Fluorescencyjny ilościowy PCR jest metodą techniczną opracowaną w celu rozwiązania tego problemu.General time PCR i PCR ilościowy (qPCR) generalnie się do tego odnoszą.

Różnica w stosunku do zwykłej PCR polega na kwantyfikacji fluorescencji?

Tak, to znaczy na etapie wydłużania każdego cyklu PCR wykrywana jest intensywność sygnału fluorescencji, a początkową ilość matrycy można obliczyć zgodnie ze zmianą intensywności sygnału.

To takie skomplikowane!Czy muszę sam to obliczyć?

Wymaga to powolnego uczenia się, najlepiej jest być w stanie zrozumieć zasadę.Teraz możesz najpierw skupić się na wartości CT, która jest stosunkowo intuicyjnymi danymi eksperymentalnymi, a jej rozmiar odpowiada wielkości początkowej ilości szablonu.Istnieją również wykresy, takie jak krzywe amplifikacji i krzywe topnienia.To oni decydują o tym, czy Twój eksperyment się powiódł, czy nie.

Och, bracie.Następnie przeprowadzę eksperyment qPCR!

Zwróć szczególną uwagę, aby nie dodawać szablonów do obszaru odczynników, w przeciwnym razie niewykorzystana mieszanka będzie łatwo zanieczyszczona!

Rozumiem!