Jak wybrać polimerazę typu „hot start” Taq/DNA?

Enzym Hot-start Taq jest szeroko stosowany.W porównaniu ze zwykłą polimerazą DNA, enzym Taq typu hot start może skutecznie uniknąć pewnej niespecyficznej amplifikacji i tworzenia dimerów starterów oraz może skutecznie poprawić wskaźnik powodzenia amplifikacji docelowego genu.Zwłaszcza w dziedzinie testów genetycznych, enzym Taq hot-start został zidentyfikowany jako obowiązkowy standard w przemyśle i nie należy stosować zwykłej polimerazy DNA.Jak widać z powyższego, enzymy gorącego startu Taq są szeroko stosowane.Obecnie na rynku krajowym istnieje wiele marek enzymów hot-start Taq, ale enzymów hot-start Taq o wysokiej jakości jest niewiele.W obliczu tak wielu gorących produktów enzymatycznych Taq, jak powinniśmy wybrać?

1. Wybierz gorący enzym Taq o wysokiej wydajności amplifikacji

Wydajność amplifikacji PCR jest ściśle związana z wydajnością enzymu Taq.Po zoptymalizowaniu dobrego układu reakcyjnego enzymu Taq, wydajność amplifikacji wynosi powyżej 95%, a zakres amplifikacji początkowej ilości matrycy jest szeroki.Zadowalającą amplifikację można uzyskać, gdy zawartość docelowego genu jest niska i nie jest łatwo zostać zatrutym, gdy ilość matrycy jest wysoka, a wykładniczy okres amplifikacji jest długi.W przypadku enzymu Taq o słabej wydajności, nawet jeśli układ reakcyjny był wielokrotnie optymalizowany, wydajność amplifikacji jest nadal mniejsza niż 90%, kształt „S” krzywej amplifikacji nie jest oczywisty, nachylenie jest małe, a krzywa jest płaska.Gdy ilość matrycy jest mała, nie można jej amplifikować, a gdy ilość matrycy jest wysoka, efekt amplifikacji nie jest idealny.Dlatego wybór polimeraz DNA o wysokiej wydajności amplifikacji ma kluczowe znaczenie dla powodzenia PCR i qPCR.

2. Wybierz gorący enzym Taq o dużej mocy enzymatycznej

Moc enzymatyczna enzymu Taq jest związana z wydajnością amplifikacji.Ogólnie rzecz biorąc, im silniejsza moc enzymatyczna enzymu hot-start Taq, tym dłuższy okres wzrostu wykładniczego amplifikacji PCR, im bardziej typowa krzywa w kształcie litery „S”, tym wyższa wartość sygnału fluorescencji i tym bardziej nadaje się do detekcji multipleks PCR .Markowe polimerazy DNA o słabej mocy enzymatycznej mogą generalnie wspierać tylko reakcje 2-pleksowe.Podczas wykonywania reakcji 3-pleksowych krzywa amplifikacji jest niska, wartość sygnału fluorescencji jest niska i nie ma typowej krzywej amplifikacji, więc wyniki są trudne do oceny.

3. Wybierz gorący enzym Taq o wysokiej czułości

Ogólnie rzecz biorąc, polimeraza DNA ma wysoką wydajność amplifikacji i wysoką czułość, ale są też niespójności.Jeśli liczebność docelowego genu w próbce do amplifikacji jest niska, zaleca się przetestowanie czułości amplifikacji enzymu Taq.Najpopularniejszą metodą detekcji jest 10-krotne lub 5-krotne rozcieńczenie gradientowe fragmentu plazmidu genu docelowego, detekcja PCR przy niższym rozcieńczeniu i selekcja enzymu hot-start Taq o wyższej czułości detekcji.

Z powyższego widać, że badacze muszą dokonywać wyboru zgodnie z własnymi wymaganiami eksperymentalnymi i warunkami finansowania.Najlepiej jest przeprowadzić eksperyment z amplifikacją z rozcieńczeniem gradientowym, aby wykryć wydajność amplifikacji i czułość enzymu gorącego startu Taq.

Przykład Foregene's Polimeraza DNA Taq:

Foreasy HS Taq polimeraza DNA

Opis

Foreasy HS Taq DNA Polymerase to polimeraza DNA ulegająca ekspresji w bakteriach inżynieryjnych Escherichia coli za pomocą technologii rekombinacji genów.Enzym jest połączony z unikalnym buforem reakcji, co sprawia, że ​​produkt jest wysoce odporny i kompatybilny, i może bezpośrednio wykorzystywać lizat próbki (system Foregene Lysis) jako matrycę do reakcji wykrywania.

Aplikacja

Jakościowa PCR i ilościowa detekcja PCR matryc oczyszczonych i matryc nieoczyszczonych.

Kontrola jakości

1. Nie wykryto egzogennej aktywności nukleazy

2. Metoda PCR do wykrywania pozostałości genomowego DNA bez gospodarza

3. Może skutecznie wzmacniać geny pojedynczej kopii w ludzkim genomie

4. Przechowuj w temperaturze pokojowej przez tydzień, nieoczywiste zmiany aktywności