Rozwijanie RNA

Rozwijanie RNA

Wstęp:

Cząsteczki RNA mogą wchodzić w intensywne interakcje z innymi cząsteczkami biologicznymi, takimi jak białko, DNA i RNA, a zatem istnieją w komórkach i organizmach w postaci kompleksów wielkocząsteczkowych.Wśród nich kompleksy RNA-białko to istnienie i funkcja RNA Jedna z ważnych form.Metoda RNA pull-down to klasyczna metoda przeszukiwania i identyfikacji cząsteczek RNA, zwłaszcza białek wchodzących w interakcje z cząsteczkami lncRNA, uznawana przez większość badaczy i autorytatywne międzynarodowe czasopisma naukowe.Dzisiaj FORREGENE podzieli się z Wami eksperymentalną zasadą i technicznym procesem wyciągania RNA, może będziecie mogli to wykorzystać

1. Eksperymentalna zasada technologii pull down RNA:

Transkrypcja i synteza in vitro znakowanych biotyną docelowych fragmentów lncRNA lub lncRNA (w tym fragmentów RNA stosowanych jako kontrola pozytywna i negatywna) oraz inkubacja z ekstraktami komórkowymi;użyć kulek magnetycznych zakotwiczonych w awidynie do zebrania kompleksów RNA-białko lub RNA-RNA. Po dokładnym przemyciu kompleks jest eluowany.W przypadku wykrycia docelowej cząsteczki białka, która oddziałuje z lncRNA, należy przeprowadzić elektroforezę białka na produkcie RNA-pull down, wykryć docelowe białko za pomocą barwienia srebrem i przeciąć żel do spektrometrii masowej;również bezpośrednio wykonać weryfikację Western blot na produkcie pull-down;w przypadku wykrycia W przypadku cząsteczek docelowych RNA, które oddziałują z lncRNA, produkty wyciągania RNA poddaje się ekstrakcji RNA i przeprowadza się swoistą detekcję qRT-PCR.

2. Proces eksperymentu technologii pull down RNA:

• Obsługa techniczna RNA pull down foregene:

Hodowlę komórkową

Przygotowanie całkowitego ekstraktu komórkowego/jądrowego/osocza białkowego

Eksperyment z wyciąganiem RNA

Elektroforeza SDS-PAGE, barwienie srebrem

Spektrometria mas i eksperymenty WB

Raport eksperymentalny

• Przypadek eksperymentalny

Poniższy rysunek przedstawia wyniki wykrywania RNA FJ Bio-Bio w dół i elektroforezy SDS-PAGE, w której czerwona strzałka oznacza prążek różnicy:

Grupa badawcza profesora Song Xu z Sichuan University zgromadziła 15 lat długoterminowej akumulacji w dziedzinie badań lncRNA.Foregene Bio i grupa badawcza profesora Song Xu współpracowali w celu uruchomienia technologii RNA pull down lncRNA, która da satysfakcjonujący wynik w twoim eksperymencie.