RT-QPCR EasyTM (One Step)-Taqman Nr kat. RT-02131/02132 Z polimerazą Taq DNA

RT-qPCR EasyTM (One Step)-Taqman Nr kat. RT-02131/02132 Jednoetapowy Master Mix RT-PCR w czasie rzeczywistym z polimerazą Taq DNA

RT-PCR EasyTM I (jeden krok)

Nr kat.RT-02011/02012

Jednoetapowy miks RT-PCR Master Mix

Wyłącznie do celów badawczych

Przechowywać w temperaturze -20 ℃

Wprowadzenie produktów

Produkty serii Foregene One-Step RT-PCR EasyTM realizują zintegrowaną reakcję od RNA do dwuniciowego DNA, co oznacza, że ​​odwrotna transkrypcja i amplifikacja PCR są realizowane w tej samej probówce wirówki reakcyjnej i tym samym systemie reakcyjnym, co upraszcza etapy eksperymentalne, optymalizuje program eksperymentalny i poprawia wydajność eksperymentu.

RT-PCR EasyTM I(One Step) to jednoetapowy zestaw RT-PCR opracowany specjalnie przez firmę Foregene, który realizuje ciągłą pracę od RT do PCR w tej samej probówce.Operacja jest prosta i szybka, co może skutecznie zmniejszyć zanieczyszczenie podczas eksperymentu.2×RT-PCR EasyTM Mix ma wysoką tolerancję, stabilność termiczną, wysoką wydajność i specyficzność amplifikacji.

Cechy

Jednoetapowy zestaw umożliwia przeprowadzenie odwrotnej transkrypcji i PCR w tej samej probówce.Wystarczy dodać matrycowy RNA, specyficzne startery PCR i ddH2O wolną od RNaz.

Analizę ilościową RNA w czasie rzeczywistym można przeprowadzić szybko i dokładnie.

Zestaw wykorzystuje unikalny odczynnik Foregene do odwrotnej transkrypcji oraz Foregene HotStar Taq DNA Polymerase w połączeniu z unikalnym systemem reakcji, aby skutecznie poprawić wydajność amplifikacji i specyficzność reakcji.

Zoptymalizowany system reakcji sprawia, że ​​reakcja ma wyższą czułość wykrywania, silniejszą stabilność termiczną i lepszą tolerancję.

Kontrola jakości produktu

Zgodnie z Total Quality Management System FOREGEN (Foregen Total Quality Management System), każda partia RT-PCR Easy^TMZestawy I (One Step) są wielokrotnie poddawane rygorystycznym testom, aby zapewnić jakość, niezawodność i stabilność każdej partii zestawów.

Zawartość zestawu

Warunki transportu i przechowywania

1. Warunki transportu

Cały proces transportu lodówek w niskich temperaturach, aby zapewnić, że zestaw jest w stanie <4 °C.

2. Warunki przechowywania

RT EasyTM I jest przechowywany w temperaturze -20°C.Natychmiast po otrzymaniu produkt przechowywać w lodówce o stałej temperaturze w temperaturze -20°C.Jeśli warunki przechowywania są odpowiednie, produkt nie pogorszy żadnej wydajności w okresie ważności 1 roku.

Informacje o komponentach zestawu

2× RT-PCR EasyTM Mix: Foregene Reverse Transcriptase, RNas Inhibitor, Foregene HotStar Taq DNA Polymerase, dNTPs, Mg2+, bufor reakcyjny, optymalizator i stabilizator itp.

Środki ostrożności:(Przed użyciem zestawu należy uważnie przeczytać środki ostrożności)

W przypadku matryc zaleca się stosowanie RNA wyekstrahowanego ze świeżych próbek lub przechowywanego w temperaturze -80℃ (RNA powinno unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania).

Aby uniknąć zanieczyszczenia RNazami, działanie eksperymentu powinno być prowadzone w przestrzeni wolnej od RNaz;używane końcówki do pipet i probówki wirówkowe do PCR muszą być wolne od RNaz;należy nosić jednorazowe rękawiczki i maski.Przed użyciem umieść 2×RT-PCR EasyTM Mix na lodzie, aby całkowicie się roztopił, strzepnij i dobrze wymieszaj przed użyciem;przygotowanie systemu powinno odbywać się w łaźni lodowej, aby poprawić działanie zestawu i specyficzność amplifikacji PCR.

Stężenie wzorcowego RNA

RT-PCR EasyTM I (jeden krok): (całkowite RNA 0,1 pg-1 μg)/system 20 μl

Aplikacja zestawu

- Ten zestaw służy do szybkiego wykrywania genów o wysokiej i niskiej liczbie kopii.

- Jest szczególnie odpowiedni do szybkiego wykrywania matryc RNA o wysokiej zawartości GC lub złożonej strukturze drugorzędowej.

Kontrola jakości produktu

Zgodnie z Total Quality Management System FOREGEN (Foregen Total Quality Management System), każda partia RT-PCR Easy^TMZestawy I (One Step) są wielokrotnie poddawane rygorystycznym testom, aby zapewnić jakość, niezawodność i stabilność każdej partii zestawów.

Przewodnik po operacjach

A: Przygotowanie materiałów i odczynników

1. Przygotuj przygotowaną matrycę RNA (zaleca się użycie zestawów serii Foregene Total RNA Isolation Kit do ekstrakcji i oczyszczania RNA), specyficzne startery (10 μM) oraz powiązane materiały eksploatacyjne i instrumenty.

Uwaga: Upewnij się, że RNA jest integralne i spróbuj użyć RNA wyekstrahowanego ze świeżych próbek.

2. Umieść 2x RT-PCR EasyTM Mix i ddH2O bez RNaz na łaźni lodowej, aby pozwolić mu się naturalnie stopić, a następnie przetrzyj ściankę probówki, aby dobrze wymieszać do późniejszego użycia.

B: Przygotowanie systemu RT-PCR

2×RT-PCR EasyTM Mix jest wygodny i szybki w użyciu, w największym stopniu unikając zanieczyszczeń podczas pracy i błędów doświadczalnych spowodowanych wielokrotnym przygotowaniem układu reakcyjnego.Używając tylko połowę objętości układu reakcyjnego (np. jeśli układ reakcyjny ma 20 μl, weź 10 μl roztworu 2×RT-PCR EasyTM Mix), dodaj odpowiednią ilość matrycy RNA i specyficznych starterów oraz dodaj ddH2O bez RNaz aby nadrobić objętość.Patrz Tabela 1 poniżej, aby zapoznać się z konkretnym przygotowaniem układu reakcyjnego RT-PCR.

Formularz 1: Przygotowanie systemu RT-PCR

1*: Zwykle końcowe stężenie podkładu wynosi 0,2-0,25 μM, aby uzyskać lepsze wyniki.Gdy wydajność reakcji jest słaba, stężenie podkładu można regulować w zakresie 0,1-0,5 μM.

Uwaga: Forward Primer i Reverse Primer są specyficznymi starterami dla genu docelowego;System 50 μl, należy zapoznać się z systemem 20 μl, aby proporcjonalnie dostosować dozowanie odczynnika.

C: ustawienie programu reakcji RT-PCR

• Po przygotowaniu systemu RT-PCR zgodnie z powyższą tabelą, delikatnie wymieszaj (można użyć końcówki pipety do delikatnego przedmuchu; można też mieszać na worteksie i krótko odwirować, aby zebrać płyn rozsypany na ściance probówki lub wieczku probówki oraz umieścić na pojemniku na lód do późniejszego użycia).

2. Zapoznaj się z ustawieniami programu reakcji RT-PCR (Tabela 2), aby ustawić temperaturę i czas reakcji.

Uwaga: W celu zapewnienia aktywności 2×RT-PCR EasyTM Mix i poprawy wydajności amplifikacji, najlepiej przygotować system reakcyjny RT-PCR po ustawieniu programu aparatu PCR, aby program reakcji można było wprowadzić natychmiast po system jest przygotowany.

Formularz 2: Ustawienie systemu reakcji RT-PCR

Uwaga: Powyższa procedura ma jedynie charakter poglądowy.Rzeczywiste warunki reakcji różnią się w zależności od warunków strukturalnych matrycy, starterów itp. W przypadku matryc RNA o złożonych strukturach drugorzędowych zaleca się, aby temperatura reakcji dla pierwszego etapu odwrotnej transkrypcji wynosiła 50°C.W konkretnej operacji konieczne jest zaprojektowanie optymalnych warunków reakcji, w tym temperatury hybrydyzacji, czasu wydłużania itp. zgodnie z określonymi warunkami wielkości docelowego fragmentu, sekwencji zasad amplifikowanego fragmentu oraz zawartości GC i długości podkład.
Schemat działania RT-PCR

Foregene odwrotna transkryptaza

Odwrotna transkryptaza Foregene może zapewnić wysoce wydajną i specyficzną reakcję odwrotnej transkrypcji.Odwrotna transkryptaza wykazuje wysokie powinowactwo i nadal utrzymuje dobrą aktywność odwrotnej transkrypcji w temperaturze reakcji 50°C.Może dobrze odwrócić transkrypcję RNA o złożonej strukturze drugorzędowej, z którą inne odwrotne transkryptazy nie mogą sobie poradzić.Odwrotna transkryptaza Foregene ma wysoką czułość i ma zastosowanie w szerokim zakresie ilości RNA (0,1pg≤RNA≤1μg).

Foregene HotStar Taq polimeraza DNA

Zapewnia wysoce specyficzną amplifikację PCR.W trakcie odwrotnej transkrypcji polimeraza DNA jest całkowicie nieskuteczna i nie utrudnia reakcji odwrotnej transkrypcji.Po zakończeniu programu reakcji PCR, podgrzaniu do 94°C, polimeraza DNA jest aktywowana, a odwrotna transkryptaza jest inaktywowana.Proces gorącego startu eliminuje powstawanie nieswoistych starterów hybrydyzujących i dimerów starterów w pierwszym cyklu, zapewniając wysoką specyficzność i niezawodność amplifikacji PCR.

Ostrożność:(Przed użyciem zestawu należy uważnie przeczytać środki ostrożności)

- Odczynniki powinny unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania, w przeciwnym razie działanie odczynników zmniejszy się lub stanie się nieważne.

- Zaleca się stosowanie ekstrakcji świeżej próbki lub matrycowego RNA przechowywanego w temperaturze -80℃ (RNA powinno unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania).

- Aby uniknąć skażenia RNazami, działanie eksperymentu należy przeprowadzić w przestrzeni wolnej od RNaz;używane końcówki do pipet i probówki do PCR muszą być wolne od RNaz;należy nosić jednorazowe rękawiczki i maski.

- Ten zestaw musi być używany z określonymi starterami do eksperymentów.Proszę wybrać specyficzne startery dla genu do amplifikacji zgodnie z potrzebami eksperymentu.

- Przed użyciem umieść 2× RT-PCR Easy^TMMieszaj na lodzie do całkowitego stopienia, trzep i dobrze wymieszaj przed użyciem;przygotowanie systemu powinno odbywać się w łaźni lodowej, aby poprawić działanie zestawu i specyficzność amplifikacji PCR.