RT-PCR EasyTM II Two Step Nr kat. RT-02021/02022 Two Step RT PCR Master Mix Zestawy PCR

RT-PCR EasyTM II (dwuetapowy) Nr kat. RT-02021/02022 Dwuetapowy RT-PCR Master Mix PCR Kits

Łatwy RT-PCR^TM II(dwuetapowy)

Nr kat.RT-02021/02022

Dwuetapowy miks RT-PCR Master Mix

RT-PCR EasyTM II (dwuetapowy)

Nr kat.RT-02021/02022

Dwuetapowy miks RT-PCR Master Mix

Wyłącznie do celów badawczych

Przechowywać w temperaturze -20 ℃

Wprowadzenie produktów

RT-PCR EasyTM II (dwuetapowy) zawiera wszystkie odczynniki do dwuetapowego RT-PCR, łącząc reakcję RT i reakcję PCR w tym samym zestawie, zapewniając zoptymalizowane RT Mix i PCR Mix.Unikalny RT Mix może łatwo i wydajnie syntetyzować wysokiej jakości pierwszej nici cDNA.2× PCR EasyTM Mix Plus charakteryzuje się wysoką wydajnością i specyficzną amplifikacją.Organiczne połączenie tych dwóch sprawia, że ​​wykrywanie genu docelowego jest bardziej czułe.

Cechy

Analizę ilościową RNA w czasie rzeczywistym można przeprowadzić szybko i dokładnie.

Zestaw wykorzystuje unikalny odczynnik Foregene do odwrotnej transkrypcji oraz Foregene HotStar Taq DNA Polymerase w połączeniu z unikalnym systemem reakcji, aby skutecznie poprawić wydajność amplifikacji i specyficzność reakcji.

Zoptymalizowany system reakcji sprawia, że ​​reakcja ma wyższą czułość wykrywania, silniejszą stabilność termiczną i lepszą tolerancję.

Zawartość zestawu

Warunki transportu i przechowywania

1. Warunki transportu

Cały proces transportu lodówek w niskich temperaturach, aby zapewnić, że zestaw jest w stanie <4 °C.

2. Warunki przechowywania

Przechowywany w temperaturze -20°C.Natychmiast po otrzymaniu produkt przechowywać w lodówce o stałej temperaturze w temperaturze -20°C.Jeśli warunki przechowywania są odpowiednie, produkt nie pogorszy żadnej wydajności w okresie ważności 1 roku.

Informacje o komponentach zestawu

2× RT EasyTM Mix: Foregene Reverse Transcriptase, inhibitor RNazy, dNTP, bufor reakcyjny, optymalizator i stabilizator itp.

2× PCR EasyTM Mix Plus :Foregene Taq DNA Polymerase, dNTPs, Mg2+, bufor reakcyjny, optymalizator i stabilizator.

Środki ostrożności: (Przeczytaj uważnie środki ostrożności przed użyciem zestawu)

Odczynniki powinny unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania, w przeciwnym razie działanie odczynników zmniejszy się lub stanie się nieważne.

W przypadku matryc zaleca się stosowanie RNA wyekstrahowanego ze świeżych próbek lub przechowywanego w temperaturze -80℃ (RNA powinno unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania).

Aby uniknąć zanieczyszczenia RNazami, działanie eksperymentu powinno być prowadzone w przestrzeni wolnej od RNaz;używane końcówki do pipet i probówki wirówkowe do PCR muszą być wolne od RNaz;należy nosić jednorazowe rękawiczki i maski.

Ten zestaw musi być używany z określonymi starterami do eksperymentów.Proszę wybrać specyficzne startery dla genu do amplifikacji zgodnie z potrzebami eksperymentu.

Przed użyciem umieść 2×RT EasyTM Mix i 2×PCR EasyTM Mix Plus na lodzie, aby całkowicie się roztopiły, strzepnęły i dobrze wymieszały przed użyciem;przygotowanie systemu powinno odbywać się w łaźni lodowej, aby poprawić działanie zestawu i poprawić specyficzność amplifikacji PCR.

Środki ostrożności:(Przed użyciem zestawu należy uważnie przeczytać środki ostrożności)

- Odczynniki powinny unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania, w przeciwnym razie działanie odczynników zmniejszy się lub stanie się nieważne.

- W przypadku matryc zaleca się stosowanie RNA wyekstrahowanego ze świeżych próbek lub przechowywanego w temperaturze -80℃ (RNA powinno unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania).

- Aby uniknąć zanieczyszczenia RNazami, działanie eksperymentu powinno być prowadzone w przestrzeni wolnej od RNaz;używane końcówki do pipet i probówki wirówkowe do PCR muszą być wolne od RNaz;należy nosić jednorazowe rękawiczki i maski.

- Ten zestaw musi być używany z określonymi starterami do eksperymentów.Proszę wybrać specyficzne startery dla genu do amplifikacji zgodnie z potrzebami eksperymentu.

- Przed użyciem umieść 2×RT Easy^TMWymieszaj i 2×PCR Łatwy^TMWymieszaj Plus na lodzie, aby całkowicie się stopił, strzepnij i dobrze wymieszaj przed użyciem;przygotowanie systemu powinno odbywać się w łaźni lodowej, aby poprawić działanie zestawu i poprawić specyficzność amplifikacji PCR.

Stężenie wzorcowego RNA

RT-PCR EasyTM II (dwuetapowy): (całkowite RNA 0,1 pg-5 μg)/system 20 μl

Przewodnik po operacjach

A-1: Przygotowanie materiałów i odczynników

1. Przygotuj przygotowaną matrycę RNA (zaleca się użycie zestawów serii Foregene Total RNA Isolation Kit do ekstrakcji i oczyszczania RNA), specyficzne startery (10 μM) oraz powiązane materiały eksploatacyjne i instrumenty.

Uwaga: Upewnij się, że RNA jest integralne i spróbuj użyć RNA wyekstrahowanego ze świeżych próbek.

2. Umieść 2×RT EasyTM Mix i ddH2O bez RNaz na łaźni lodowej, aby naturalnie się rozpuścił, a następnie przetrzyj ścianką probówki, aby dobrze wymieszać do późniejszego użycia.

A-2:Przygotowanie systemu RT

2× RT EasyTM Mix jest wygodny i szybki w użyciu, unikając w największym stopniu zanieczyszczeń podczas pracy i błędów doświadczalnych spowodowanych wielokrotnym przygotowywaniem układu reakcyjnego.Podczas używania wystarczy pobrać połowę objętości układu reakcyjnego (na przykład, jeśli układ reakcyjny ma 20 μl, weź 10 μl roztworu 2×RT EasyTM Mix), dodać matrycę RNA i startery do odwrotnej transkrypcji oraz dodać ddH2O bez RNaz, aby uzupełnić objętość do 20 μl.Konkretne przygotowanie układu reakcyjnego RT można znaleźć w Tabeli 1 poniżej.

Formularz 1: Przygotowanie systemu RT

A-3: ustawienie programu reakcji RT

1. Po przygotowaniu systemu RT zgodnie z powyższą tabelą należy delikatnie wymieszać (można użyć końcówki pipety do delikatnego przedmuchu; można również wymieszać na worteksie i odwirować w celu zebrania płynu rozsypanego na ściance probówki lub korku probówki i umieść go w gotowym do użycia pojemniku na lód).

2. Zapoznaj się z ustawieniami programu reakcji RT (Tabela 2), aby ustawić temperaturę reakcji, czas itp.

Uwaga: Aby zapewnić aktywność Mixa i poprawić jego wydajność amplifikacji, najlepiej przygotować układ reakcyjny RT po osiągnięciu przez kąpiel metalową zadanej temperatury reakcji (temperatura odwróconej transkrypcji 42℃ lub 50℃), aby układ mógł być przygotowany natychmiast po zakończeniu przygotowania systemu.Wejdź do programu reakcji.Reakcję RT można również przeprowadzić na maszynie do PCR.

Formularz 2: Ustawienie programu reakcji RT

Uwaga: W przypadku użycia startera Random, reakcję należy wstępnie ogrzać w temperaturze 25°C przez 10 minut przed pierwszym etapem reakcji.Powyższa procedura ma jedynie charakter poglądowy.Rzeczywiste warunki reakcji różnią się w zależności od warunków strukturalnych matrycy, starterów itp. W przypadku matryc RNA ze złożonymi wynikami wtórnymi zaleca się, aby temperatura pierwszej reakcji wynosiła 50°C.

1. Produkt reakcji można wykorzystać bezpośrednio w kolejnych testach lub przechowywać w temperaturze -20°C do tygodnia.W przypadku przechowywania długoterminowego zaleca się unikanie wielokrotnego zamrażania i rozmrażania w temperaturze -80°C.

B: reakcja identyfikacji PCR

B-1: Przygotowanie układu reakcji PCR

Użyj cDNA zsyntetyzowanego w etapie A jako matrycy i przeprowadź reakcję PCR za pomocą zestawu 2×PCR EasyTM Mix Plus dostarczonego w zestawie.Umieść 2×PCR EasyTM Mix Plus, cDNA i ddH2O bez RNaz na łaźni lodowej, aby naturalnie się rozpuściły, a następnie przetrzyj ścianką probówki, aby wymieszać aż do użycia.W celu zapoznania się z konkretnym przygotowaniem systemu PCR, należy zapoznać się z Tabelą 3 poniżej.

Formularz 3: Przygotowanie układu reakcji PCR反应体系配制

1*: Zwykle końcowe stężenie podkładu wynosi 0,2-0,25 μM, aby uzyskać lepsze wyniki.Gdy wydajność reakcji jest słaba, stężenie podkładu można regulować w zakresie 0,1-0,5 μM.

B-2: ustawienie warunków reakcji PCR

1. Po przygotowaniu systemu PCR zgodnie z powyższą tabelą należy delikatnie wymieszać (można użyć końcówki pipety do delikatnego przedmuchu; można również wymieszać na worteksie i odwirować w celu zebrania cieczy rozsypanej na ściance probówki lub korku probówki i umieść go w gotowym do użycia pojemniku na lód).

2. Zapoznaj się z ustawieniami programu reakcji PCR (Tabela 4), aby ustawić temperaturę i czas reakcji.

Uwaga: Aby zapewnić aktywność mieszaniny PCR Mix i poprawić jej wydajność amplifikacji, najlepiej ustawić warunki PCR w urządzeniu do PCR przed przygotowaniem systemu PCR.

Formularz 4: Ustawienie warunków reakcji PCR

1*: Ustaw konkretny czas zgodnie z długością amplifikowanego fragmentu docelowego.Szybkość amplifikacji polimerazy Foregene Taq DNA wynosi 2 kb/min.

Uwaga: Warunki reakcji PCR różnią się w zależności od warunków strukturalnych matrycy, starterów itp. W przypadku matryc RNA o złożonych strukturach drugorzędowych zaleca się, aby temperatura reakcji dla pierwszego etapu odwrotnej transkrypcji wynosiła 50°C.W określonych operacjach konieczne jest zaprojektowanie optymalnych warunków reakcji, w tym temperatury hybrydyzacji, czasu wydłużania itp., zgodnie z określonymi warunkami, takimi jak wielkość docelowego fragmentu, sekwencja zasad amplifikowanego fragmentu oraz zawartość GC i długość podkładu.

Schemat działania RT-PCR