Zestaw do izolacji DNA tkanki zwierzęcej DE-05011/05012/05013 Do oczyszczania genomowego DNA

Zestaw do izolacji DNA tkanki zwierzęcej Nr kat. DE-05011/05012/05013 Do oczyszczania genomowego DNA z komórek hodowlanych i zwierząt

Tkanka zwierzęcaZestaw do izolacji DNA

Nr kat. DE-05011/05012/05013

Do oczyszczania genomowego DNA z hodowanych komórek i tkanek zwierzęcych

Opis produktu:

Ten zestaw wykorzystuje kolumnę tylko do DNA, która może specyficznie wiązać DNA, proteazę Foregene i unikalny system buforowy.Wysokiej jakości genomowy DNA można wyekstrahować z różnych hodowanych komórek i tkanek zwierzęcych w ciągu 30 do 50 minut.

Membrana z żelu krzemionkowego oparta wyłącznie na DNA, zastosowana w wirówce, to unikalny nowy materiał firmy Foregene, który może skutecznie i specyficznie wiązać się z DNA i maksymalizować usuwanie RNA, białek zanieczyszczających, jonów i innych związków organicznych z komórek.5-80 μg wysokiej jakości genomowego DNA można oczyścić z 10-50 mg tkanki.

Składniki produktu:

Funkcje i zalety:

-Brak zanieczyszczenia RNazą: Dostarczona w zestawie kolumna DNA-Only umożliwia usunięcie RNA z genomowego DNA bez dodatkowej RNazy podczas eksperymentu, zapobiegając w ten sposób skażeniu laboratorium przez egzogenną RNazę.

-Duża prędkość: Foregene Protease ma wyższą aktywność niż podobne proteazy i szybciej trawi próbki tkanek;

-Proste: operację oczyszczania genomowego DNA można zakończyć w 50 minut.

-Wygodny: wirowanie odbywa się w temperaturze pokojowej, wirowanie w temperaturze 4℃ i wytrącanie DNA etanolem nie jest wymagane.

-Bezpieczeństwo: nie stosuje się odczynnika organicznego.

-Wysoka jakość: oczyszczony genomowy DNA zawiera duże fragmenty, bez RNA, bez RNazy i wyjątkowo niską zawartość jonów, co może spełnić wymagania różnych eksperymentów.

Zastosowania genomowego DNA:

Genomowy DNA oczyszczony za pomocą zestawu Animal Tissue DNA Isolation Kit ma wysoką czystość i może być używany do rutynowych operacji biologii molekularnej, takich jak: trawienie enzymatyczne, PCR, hybrydyzacja Southerna, konstrukcja biblioteki i inne eksperymenty.

Kontrola jakości produktu:

Zgodnie z Total Quality Management System FOREGENE, każda partia zestawów do izolacji DNA z tkanek zwierzęcych jest wielokrotnie testowana w celu zapewnienia niezawodności i stabilności jakości każdej partii zestawów.

Wydajność i czystość ekstrakcji genomowego DNA:

Wydajność ekstrakcji genomowego DNA tkanki zwierzęcej zależy od źródła tkanki, warunków przechowywania, czasu przechowywania, dawki i innych czynników.Czystość otrzymanego genomowego DNA spełnia rutynową operację eksperymentalną biologii molekularnej, a jego OD260/280 wynosi między 1,7-1,9.Wydajność genomowego DNA wyekstrahowanego przy użyciu tego zestawu pokazano w poniższej tabeli:

Środki ostrożności:(Przed użyciem zestawu należy uważnie przeczytać środki ostrożności)

- Próbka powinna unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania, w przeciwnym razie wyekstrahowane fragmenty DNA będą mniejsze, a wydajność ekstrakcji zmniejszona.

- Przed użyciem zestawu należy dokładnie sprawdzić, czy w Buforze L1, Buforze L2 i Buforze PW występują opady.W przypadku opadów należy rozpuścić go w temperaturze 37 ℃, dobrze wymieszać przed użyciem.

- Przed użyciem zestawu należy sprawdzić, czy Buffer WB jest dodany z bezwodnym etanolem zgodnie z instrukcją.Do buforu WB dodano 60 ml bezwodnego etanolu (DE-05011), 120 ml bezwodnego etanolu (DE-05012) i 300 ml bezwodnego etanolu (DE-053013) przed użyciem.

- Objętość elucji: Bufor EB nie powinien być mniejszy niż 100 μl, w przeciwnym razie wpłynie to na wydajność DNA.

- Pamiętaj, aby nie dodawać RNazy do żadnego bufora.

- Wszystkie etapy wirowania są wirowane w temperaturze pokojowej (15-25℃) przy użyciu wirówki stacjonarnej.

- Wszystkie etapy eksperymentalne przeprowadzono w temperaturze pokojowej (15-25℃).

Przechowywanie i okres trwałości:

- Zestaw można przechowywać przez 12 miesięcy w temperaturze pokojowej (15-25 ℃) lub 2-8 ℃ przez dłuższy czas.

Uwaga: W przypadku przechowywania w niskiej temperaturze roztwór jest podatny na wytrącanie.Przed użyciem należy umieścić roztwór w zestawie w temperaturze pokojowej na pewien czas.Jeśli to konieczne, podgrzej go w łaźni wodnej o temperaturze 37 ℃ przez 10 minut, aby rozpuścić osad i wymieszaj przed użyciem.

- Roztwór Foregene Protease ma unikalną formułę i jest aktywny przez długi czas (3 miesiące) w temperaturze pokojowej;jego aktywność i stabilność będą lepsze, gdy będą przechowywane w temperaturze 4 ℃, dlatego zaleca się przechowywanie jej w temperaturze 4 ℃, pamiętaj, aby nie przechowywać jej w temperaturze -20 ℃.

Kolumna tylko DNApostacie

*: Minimalny system elucji 100 μl jest rozsądną zalecaną objętością podaną z uwzględnieniem szybkości odzyskiwania i stężenia DNA.Jeżeli w celu zwiększenia wydajności DNA można odpowiednio zwiększyć objętość eluatu;jeśli w celu zwiększenia stężenia oczyszczonego DNA można odpowiednio zmniejszyć objętość eluatu, zakładając poświęcenie części uzysku DNA, np. stosując system elucji 50 μl, w celu uzyskania wyższych stężeń DNA.

Wydajność i czystość ekstrakcji genomowego DNA

Wydajność ekstrakcji genomowego DNA tkanki zwierzęcej zależy od źródła tkanki, warunków przechowywania, czasu przechowywania, dawki i innych czynników.Czystość otrzymanego genomowego DNA spełnia rutynową operację eksperymentalną biologii molekularnej, a jego OD260/280 wynosi między 1,7-1,9.Wydajność genomowego DNA wyekstrahowanego przy użyciu tego zestawu pokazano w poniższej tabeli:

Uwaga: dane w tej tabeli służą wyłącznie jako odniesienie.W rzeczywistej eksploatacji uzyskane dane będą nieznacznie różnić się od danych w tej tabeli ze względu na takie czynniki, jak warunki przechowywania i sprawność operacyjna użytych materiałów.

Przepływ pracy

Przewodnik po analizie problemów

Poniżej znajduje się analiza problemów, które można napotkać podczas ekstrakcji genomowego DNA z próbek tkanek, mając nadzieję, że będą pomocne w twoich eksperymentach.Ponadto w przypadku innych problemów eksperymentalnych lub technicznych, innych niż instrukcje obsługi i analiza problemów, oferujemy dedykowane wsparcie techniczne, które może Ci pomóc.Jeśli masz jakiekolwiek potrzeby, skontaktuj się z nami: 028-83360257 lub e-mali: Tech@foregene.com.

Niska wydajność lub brak DNA

Zwykle istnieje wiele czynników, które wpływają na wydajność genomowego DNA, w tym źródło próbki, warunki przechowywania próbki, obróbka wstępna próbki, manipulacja itp.

Podczas ekstrakcji nie udało się uzyskać genomowego DNA

1. Próbki tkanek są niewłaściwie przechowywane lub przechowywane zbyt długo, co prowadzi do degradacji genomowego DNA.

Zalecenie: Próbki tkanek przechowywać w ciekłym azocie lub -80°C;spróbuj użyć nowo zebranych próbek tkanek do ekstrakcji genomowego DNA.

2. Zbyt małe zużycie tkanki może prowadzić do niepowodzenia ekstrakcji odpowiedniego genomowego DNA.

Sugestia: W przypadku próbek tkanek, które były przechowywane przez długi czas lub mają poważną degradację genomowego DNA, ilość próbek tkanek można odpowiednio zwiększyć w celu wyekstrahowania znacznej ilości genomowego DNA.Ilość próbki można określić zgodnie z potrzebami DNA, ale nie powinna przekraczać 50 mg.

3. Niewłaściwe przechowywanie Foregene Protease skutkuje zmniejszoną lub dezaktywowaną aktywnością.

Zalecenie: Potwierdź warunki przechowywania Foregene Protease lub zastąp ją nową Foregene Protease do hydrolizy enzymatycznej.

4. Zestaw jest niewłaściwie przechowywany lub przechowywany zbyt długo, co powoduje awarię niektórych elementów zestawu.

Zalecenie: Kup nowy zestaw do ekstrakcji genomowego DNA z tkanek zwierzęcych do powiązanych operacji.

5. Niewłaściwe użycie zestawu.Na przykład niektóre chusteczki wymagają specjalnych zestawów do przetwarzania.

Rekomendacja: Zakup zestawu do próbek, takiego jak ekstrakcja genomowego DNA z gleby, wymaga zakupu dedykowanego zestawu do izolacji Soil DNA Isolation Kit.

6. Bufor WB bez dodawania bezwodnego etanolu.

Zalecenie: Upewnij się, że dodajesz odpowiednią objętość bezwodnego etanolu do Buffer WB.

7. Eluent nie został prawidłowo nakroplony na membranę krzemionkową.

Sugestia: Dodać kroplami wstępnie ogrzany eluent w temperaturze 65°C na środek membrany z żelu krzemionkowego i pozostawić w temperaturze pokojowej na 5 minut, aby zwiększyć wydajność elucji.

Wytłoczonygenomowy DNAz niską wydajnością

1. Próbka jest niewłaściwie przechowywana lub przechowywana zbyt długo, co prowadzi do degradacji genomowego DNA.

Zalecenie: Przechowuj próbki tkanek w ciekłym azocie lub -80;spróbuj użyć nowo zebranych próbek tkanek do ekstrakcji genomowego DNA.

2. Jeśli ilość próbek tkanek jest zbyt mała, wyekstrahowany genomowy DNA będzie mniejszy.

Sugestia: W przypadku próbek tkanek, które były przechowywane przez długi czas lub mają poważną degradację genomowego DNA, ilość próbek tkanek można odpowiednio zwiększyć, aby uzyskać znaczną ilość genomowego DNA.Ilość próbki można określić zgodnie z potrzebami DNA, ale nie powinna przekraczać 50 mg.

3. Nadmierna ilość próbki doprowadzi do niepełnego trawienia i niepełnego odwirowania.Kolumna do oczyszczania może być zablokowana podczas wirowania na kolumnie, a wyekstrahowany genomowy DNA będzie mniejszy.

Sugestia: W zależności od różnych tkanek dawkę należy dostosować w granicach 10-50 mg.Gdy trawienie jest niepełne lub kolumna oczyszczająca jest zablokowana, należy zmniejszyć odpowiednią dawkę tkanki.

4. Próbka nie została wstępnie przetworzona lub nie została przetworzona w całości.

Sugestia: Specjalnie zakonserwowane próbki lub niektóre stosunkowo specjalne próbki muszą być poddane wstępnej obróbce przed hydrolizą enzymatyczną, która może usunąć roztwór konserwujący próbki lub czynniki wpływające na aktywność proteazy, aby reakcja hydrolizy enzymatycznej mogła być przeprowadzona dokładniej i można uzyskać genomowy DNA o wyższej wydajności uzyskany.

5. Specjalnie zakonserwowane próbki tkanek, takie jak zatopione w parafinie, ogon szczura itp.

Zalecenie: Kup dedykowany zestaw do ekstrakcji genomowego DNA, taki jak próbki zatopione w parafinie, możesz wybrać zestaw do izolacji DNA FFPE;próbki ogona myszy, możesz wybrać zestaw Mouse Tail DNA Mini Kit.Tkanki te są leczone specjalnymi zestawami, a wydajność ekstrakcji DNA będzie wyższa, a efekt bardziej idealny.

6. Niewłaściwe przechowywanie Foregene Protease skutkuje zmniejszoną lub dezaktywowaną aktywnością.

Zalecenie: Potwierdź warunki przechowywania Foregene Protease lub zastąp ją nową Foregene Protease do hydrolizy enzymatycznej.

7. Problem eluentu.

Zalecenie: Do elucji należy stosować Buffer EB;jeśli używasz ddH₂O lub inne eluenty, upewnij się, że pH eluentu wynosi 7,0-8,5.

8. Eluent nie został prawidłowo dodany kroplami.

Sugestia: Dodaj kroplę elucji na środek membrany krzemionkowej i pozostaw ją w temperaturze pokojowej na 5 minut, aby zwiększyć wydajność elucji.

9. Objętość eluentu jest za mała.

Sugestia: Do elucji genomowego DNA należy używać eluentu zgodnie z instrukcją, przynajmniej nie mniej niż 100 μl.

Ekstrahowany genomowy DNA o niskiej czystości

Niska czystość genomowego DNA doprowadzi do niepowodzenia lub niezadowalającego efektu dalszych eksperymentów, takich jak: nie można wyciąć enzymu, a docelowego fragmentu genu nie można uzyskać za pomocą PCR.

1. Zanieczyszczenie różnymi białkami, zanieczyszczenie RNA.

Analiza: Bufor PW nie był używany do przemywania kolumny;Bufor PW nie był używany do płukania kolumny przy prawidłowej szybkości wirowania.

Zalecenie: Staraj się zapewnić, aby supernatant nie wytrącał się z kolumny podczas przepuszczania supernatantu;należy przemyć kolumnę oczyszczającą buforem PW zgodnie z instrukcją, a tego kroku nie można pominąć.

2. Zanieczyszczenie jonami jonów.

Analiza: Kolumna do płukania Buffer WB została pominięta lub przemyta tylko raz, co spowodowało resztkowe zanieczyszczenie jonowe.

Zalecenie: Należy pamiętać o dwukrotnym przemyciu buforem WB zgodnie z instrukcją, aby usunąć jak najwięcej jonów resztkowych.

3. Zanieczyszczenie RNazą.

Analiza: do bufora dodaje się egzogenną RNazę;nieprawidłowa operacja płukania buforem PW skutkuje resztkową RNazą, która wpływa na dalsze operacje eksperymentalne RNA, takie jak transkrypcja in vitro.

Sugestia: Zestawy do ekstrakcji kwasów nukleinowych serii Foregene mogą usuwać RNA bez dodatkowej RNazy, a wszystkie odczynniki w zestawie Animal Tissue DNA Isolation Kit nie wymagają RNazy;należy przemyć kolumnę oczyszczającą buforem PW zgodnie z instrukcją, a tego kroku nie można pominąć.

4. Pozostałości etanolu.

Analiza: Po przemyciu kolumny do oczyszczania buforem WB nie przeprowadzono wirowania w pustej probówce.

Zalecenie: Postępuj zgodnie z instrukcjami dotyczącymi prawidłowego wirowania pustej probówki.

5. Inne zanieczyszczenia zanieczyszczenia.

Analiza: Zapisane próbki lub próbki specjalne nie zostały wstępnie przetworzone.

Zalecenie: Starannie przygotować próbkę zgodnie z instrukcją obsługi.