Odczynnik laboratoryjny Zestawy do odwrotnej transkrypcji RT EASY II Do generowania materiałów i sprzętu pierwszej nici CDNA Odczynnik laboratoryjny

Szybki i bardzo czuły zestaw odczynników laboratoryjnych do odwrotnej transkrypcji RT EASY II do generowania pierwszej nici cDNA

Aplikacja zestawu

Stosowany bezpośrednio do ilościowej analizy ekspresji genów metodą Real Time PCR.

Potrafi szybko i dokładnie analizować śladowe ilości RNA, takie jak wirusy RNA.

Odwrotna transkrypcja matryc RNA o wysokiej zawartości GC lub złożonej strukturze drugorzędowej.

Informacje o składnikach zestawu

2×RT LUB-Łatwy^TMMieszanka: Foregene Odwrotna Transkryptaza, Inhibitor RNazy, dNTP, Stabilizator, Wzmacniacz, Optymalizator i Podkład Odwrotnej Transkrypcji (Random Primer, Oligo(dT)₁₈Primer) o zoptymalizowanym stosunku.

Tolerancja mieszanki RT

2×RT LUB-Łatwy^TMMieszanka wykazała bardzo wysoką tolerancję na alkohol i sole guanidyny po analizie testowej.Oczyszczony w laboratorium RNA często zawiera pozostałości soli alkoholowych i guanidyny, które mają silne działanie hamujące odwrotną transkrypcję, co skutkuje niezadowalającym efektem odwrotnej transkrypcji lub niską wydajnością odwrotnej transkrypcji.Tolerancja produktów serii Foregene RT Easy na alkohol i sole guanidyny sprawia, że ​​odwrotna transkrypcja jest łatwiejsza i bardziej wydajna.

Analiza tolerancji alkoholu

Analiza tolerancji soli guanidyny

Przygotowanie przed operacją

Zdecydowanie zaleca się, aby użytkownicy uważnie przeczytali instrukcję przed użyciem tego zestawu.Zestawy serii RT Easy są łatwe w obsłudze, wygodne i szybkie, a instrukcje zapewniają prawidłowe użytkowanie całego zestawu.Przed użyciem należy przygotować niezbędne materiały i sprzęt doświadczalny.

Ilość wzorcowego RNA

Najlepiej, aby matrycowe RNA było ekstrahowane ze świeżych próbek lub przechowywane w temperaturze -80°C (należy unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania RNA).

RT EasyTM II: (0,1 pg-0,5 μg całkowitego RNA lub 0,01 pg-0,05 μg mRNA)/10 μl systemu.

Niespecyficzna amplifikacja

1. Nierozsądny projekt podkładu.

Zalecenie: Zaprojektuj podkłady zgodnie z zasadami projektowania podkładów.

2. Pozostałości genomowe.

Zalecenia: Użyj zestawu do odwrotnej transkrypcji, takiego jak (nr kat. RH-01031), który zawiera ablację genomu lub projektuje startery trans-intronowe.

RT-QPCR brak sygnału wzmocnienia

1. RNA ulega degradacji.

Zalecenie: Materiał do ekstrakcji RNA powinien być tak świeży, jak to możliwe, a RNA o wysokiej jakości i czystości powinno być używane.

2. RNA zawiera inhibitory.

Zalecenie: Inhibitory odwrotnej transkrypcji zazwyczaj obejmują SDS, sole guanidyny, EDTA itp. Zaleca się przemycie precypitatu RNA 70% etanolem w celu usunięcia inhibitorów.

3. Zagadnienia projektowania podkładów.

Zalecenie: Zgodnie z zasadą projektowania podkładów przeprojektować podkłady do kontroli.

W pustej kontrolce pojawi się pasmo docelowe

1. Zanieczyszczenie narzędzi roboczych lub odczynników.

Zalecenie: Wszystkie odczynniki lub sprzęt do eksperymentu powinny być autoklawowane.Zachowaj ostrożność i delikatność, aby zapobiec wciągnięciu próbek DNA do pipety lub wylaniu ich z probówki wirówkowej.

2. Zanieczyszczenia wystąpiły podczas przygotowywania układu reakcyjnego PCR.

Zalecenie: Podczas obsługi należy zachować niezbędne środki ostrożności, np.: Nosić rękawiczki lateksowe, Używać końcówek z filtrem.Stosować PCR Mix w czasie rzeczywistym w systemie odpornym na zanieczyszczenia.

3. Startery są zdegradowane.

Zalecenie: Użyj elektroforezy SDS-PAGE do wykrycia, czy startery uległy degradacji i zastąp nowymi starterami do eksperymentów z wykrywaniem fluorescencji.