Odwrotna transkryptaza Foreasy M-MLV

Foreasy Nowa generacja enzymu odwrotnej transkryptazy RT M-MLV Foreasy na sprzedaż

Wprowadzenie produktów

Odwrotna transkryptaza Foreasy M-MLV to nowa odwrotna transkryptaza eksprymowana w zmodyfikowanych bakteriach E. coli przy użyciu technologii rekombinacji genetycznej.Jest to rekombinowana polimeraza DNA, która syntetyzuje komplementarną nić DNA z jednoniciowego RNA, DNA lub hybrydy RNA:DNA.Nie ma aktywności RNazy H, silnej stabilności, silnego powinowactwa RNA i wysokiej czułości wykrywania.

Składniki produktu:

Rodzaj

Magazynowanie

Przechowywać w temperaturze -20±5℃ przez 2 lata lub w temperaturze -80℃ do przechowywania długoterminowego.

Aplikacja

u Synteza pierwszej nici cDNA do RT-PCR i RT-PCR w czasie rzeczywistym

u Synteza cDNA do klonowania i ekspresji.

u Generowanie znakowanych sond cDNA dla mikromacierzy.

u Analiza RNA z rozszerzeniem startera

Definicja jednostki

Jedna jednostka M-MLV RT to ilość enzymu wymagana do włączenia 1 nmola [3H] dTTP w 10 min w 37°C przy użyciu poli(A)oligo(dT)25 jako matrycy-startera.

Warunki reakcji jednostkowej

50 mM Tris-HCl (pH 8,3), 40 mM KCl, 6 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,5 mM [3H]dTTP, 0,1 mM poli(A), 0,1 mM oligo(dT)25, 0,1 mg/ml BSA, i enzym w 50 µl przez 10 min w 37°C.

Operacja :

zsyntetyzować pierwszą nić cDNA (układ reakcyjny 20 μL)

1. Struktura systemu RT (poniższe czynności należy wykonać na lodzie).

1.1 Po rozmrożeniu każdego składnika dodaj go do probówki reakcyjnej w kolejności podanej w Tabeli 1

Tabela 1:

1.2 Po przygotowaniu systemu delikatnie wymieszaj i krótko odwiruj, a następnie wykonaj reakcję RT zgodnie z poniższymi wskazówkami w Tabeli 2

Tabela 2

• Dodawanie odczynnika w kolejności jak w poniższej tabeli 3 po schłodzeniu na lodzie

Tabela 3:

1.4 Po przygotowaniu systemu delikatnie wymieszaj i krótko odwiruj, a następnie wykonaj warunki reakcji RT zgodnie z poniższą Tabelą 4

Tabela 4:

Uwaga: Używając Random Primer, reakcję należy wstępnie ogrzać w 25°C przez 10 minut przed pierwszym etapem reakcji.

Powyższa procedura ma jedynie charakter poglądowy, a rzeczywiste warunki reakcji różnią się w zależności od struktury matrycy, starterów itp.

Po zakończeniu reakcji produkt reakcji umieszcza się bezpośrednio na lodzie do kolejnych eksperymentów;w przypadku długotrwałego przechowywania należy przechowywać go w temperaturze -20°C lub -80°C.