Foregene Co., Ltd.
OBJAZDEK CHIŃSKI, OBJAZDEK ŚWIATA!
 |
| Miejsce pochodzenia: | Chiny |
| Nazwa handlowa: | FOREGENE |
| Orzecznictwo: | ISO |
| Numer modelu: | RT-02011 |
| Minimalne zamówienie: | 1 zestawy |
|---|---|
| Cena: | 224 usd per kit |
| Szczegóły pakowania: | Pakowanie z bezpiecznym kartonem trans |
| Czas dostawy: | 7-10 dni roboczych |
| Zasady płatności: | L/C, D/A, D/P, T/T, Western Union |
| Możliwość Supply: | 10000 zestawów miesięcznie |
| Nazwa produktu: | RT-qPCR EasyTM (One Step)-Taqman Nr kat. RT-02131/02132 Jednoetapowy Master Mix RT-PCR w czasie rzec | Aplikacja: | Dla reakcji qPCR |
|---|---|---|---|
| Uszczelka: | 100 RXns na zestaw | MOQ: | 1 zestawy |
| Wiodący czas: | 7-10 dni roboczych | Marka: | Foregene |
| Oem: | Przyjęty | ||
| High Light: | RT-QPCR EasyTM Taqman,Master Mix RT PCR w czasie rzeczywistym |
||
RT-QPCR EasyTM (One Step)-Taqman Nr kat. RT-02131/02132 Jednoetapowy Master Mix RT-PCR w czasie rzeczywistym
Nr kat.RT-02131/02132
Jednoetapowy miks RT-PCR w czasie rzeczywistym
RT-PCR EasyTM I (jeden krok)
Nr kat.RT-02011/02012
Jednoetapowy miks RT-PCR Master Mix
Wyłącznie do celów badawczych
Przechowywać w temperaturze -20 ℃
Produkty serii Foregene One-Step RT-PCR EasyTM realizują zintegrowaną reakcję od RNA do dwuniciowego DNA, co oznacza, że odwrotna transkrypcja i amplifikacja PCR są realizowane w tej samej probówce wirówki reakcyjnej i tym samym systemie reakcyjnym, co upraszcza etapy eksperymentalne, optymalizuje program eksperymentalny i poprawia wydajność eksperymentu.
Łatwy RT-qPCRTM(JedenKrok)-Taqmanprzy użyciu Foregene HotStar Taq DNA Polymerase, zoptymalizowany system Taqman qPCR może szybko i konkretnie przeprowadzić ilościową detekcję śladowych matryc RNA metodą RT-qPCR w czasie rzeczywistym.
- Jednoetapowy zestaw umożliwia przeprowadzenie odwrotnej transkrypcji i PCR w tej samej probówce, wystarczy dodać matrycowy RNA, specyficzne startery PCR i ddH2O bez RNaz.
- Ilościowa analiza wirusowego RNA lub śladowego RNA w czasie rzeczywistym może być przeprowadzona szybko i dokładnie.
- Zestaw wykorzystuje unikalny odczynnik Foregene do odwrotnej transkrypcji oraz polimerazę Foregene HotStar Taq DNA w połączeniu z unikalnym systemem reakcji, aby skutecznie poprawić wydajność amplifikacji i specyficzność reakcji.
- Zoptymalizowany system reakcji sprawia, że reakcja ma wyższą czułość wykrywania, silniejszą stabilność termiczną i lepszą tolerancję.
- Zestaw RT-qPCR EasyTM (One Step)-Taqman jest dostarczany z wewnętrznym barwnikiem referencyjnym ROX, którego można użyć do wyeliminowania tła sygnału i błędów sygnału między dołkami, co jest wygodne dla użytkowników końcowych w użyciu w różnych modelach przyrządów do ilościowego PCR
Kontrola jakości produktu
Zgodnie z Total Quality Management System FOREGEN (Foregen Total Quality Management System), każda partia RT-PCR EasyTMZestawy I (One Step) są wielokrotnie poddawane rygorystycznym testom, aby zapewnić jakość, niezawodność i stabilność każdej partii zestawów.
| RT-PCR EasyTM I (jeden krok) | ||
| Zawartość zestawu | RT-02011 | RT-02012 |
| 100T (system 20 μl) | 500T (system 20 μl) | |
| 2× RT-PCR EasyTM Mix | 1ml | 1,7 ml × 3 |
| ddH2O . bez RNaz | 1,7 ml | 1,7 ml × 3 |
| Instrukcja obsługi | 1 kawałek | 1 kawałek |
1. Warunki transportu
Cały proces transportu lodówek w niskich temperaturach, aby zapewnić, że zestaw jest w stanie <4 °C.
2. Warunki przechowywania
RT EasyTM I jest przechowywany w temperaturze -20°C.Natychmiast po otrzymaniu produkt przechowywać w lodówce o stałej temperaturze w temperaturze -20°C.Jeśli warunki przechowywania są odpowiednie, produkt nie pogorszy żadnej wydajności w okresie ważności 1 roku.
2× RT-PCR EasyTM Mix: Foregene Reverse Transcriptase, RNas Inhibitor, Foregene HotStar Taq DNA Polymerase, dNTPs, Mg2+, bufor reakcyjny, optymalizator i stabilizator itp.
W przypadku matryc zaleca się stosowanie RNA wyekstrahowanego ze świeżych próbek lub przechowywanego w temperaturze -80℃ (RNA powinno unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania).
Aby uniknąć zanieczyszczenia RNazami, działanie eksperymentu powinno być prowadzone w przestrzeni wolnej od RNaz;używane końcówki do pipet i probówki wirówkowe do PCR muszą być wolne od RNaz;należy nosić jednorazowe rękawiczki i maski.Przed użyciem umieść 2×RT-PCR EasyTM Mix na lodzie, aby całkowicie się roztopił, strzepnij i dobrze wymieszaj przed użyciem;przygotowanie systemu powinno odbywać się w łaźni lodowej, aby poprawić działanie zestawu i specyficzność amplifikacji PCR.
RT-PCR EasyTM I (jeden krok): (całkowite RNA 0,1 pg-1 μg)/system 20 μl
Aplikacja zestawu
- Ten zestaw służy do szybkiego wykrywania genów o wysokiej i niskiej liczbie kopii.
- Jest szczególnie odpowiedni do szybkiego wykrywania matryc RNA o wysokiej zawartości GC lub złożonej strukturze drugorzędowej.
Kontrola jakości produktu
Zgodnie z Total Quality Management System FOREGEN (Foregen Total Quality Management System), każda partia RT-PCR EasyTMZestawy I (One Step) są wielokrotnie poddawane rygorystycznym testom, aby zapewnić jakość, niezawodność i stabilność każdej partii zestawów.
A: Przygotowanie materiałów i odczynników
1. Przygotuj przygotowaną matrycę RNA (zaleca się użycie zestawów serii Foregene Total RNA Isolation Kit do ekstrakcji i oczyszczania RNA), specyficzne startery (10 μM) oraz powiązane materiały eksploatacyjne i instrumenty.
Uwaga: Upewnij się, że RNA jest integralne i spróbuj użyć RNA wyekstrahowanego ze świeżych próbek.
2. Umieść 2x RT-PCR EasyTM Mix i ddH2O bez RNaz na łaźni lodowej, aby pozwolić mu się naturalnie stopić, a następnie przetrzyj ściankę probówki, aby dobrze wymieszać do późniejszego użycia.
B: Przygotowanie systemu RT-PCR
2×RT-PCR EasyTM Mix jest wygodny i szybki w użyciu, w największym stopniu unikając zanieczyszczeń podczas pracy i błędów doświadczalnych spowodowanych wielokrotnym przygotowaniem układu reakcyjnego.Używając tylko połowę objętości układu reakcyjnego (np. jeśli układ reakcyjny ma 20 μl, weź 10 μl roztworu 2×RT-PCR EasyTM Mix), dodaj odpowiednią ilość matrycy RNA i specyficznych starterów oraz dodaj ddH2O bez RNaz aby nadrobić objętość.Patrz Tabela 1 poniżej, aby zapoznać się z konkretnym przygotowaniem układu reakcyjnego RT-PCR.
Formularz 1: Przygotowanie systemu RT-PCR
| Dodatki do systemu RT-PCR | Kwota | Koncentracja końcowa |
| 2× RT-PCR EasyTM Mix | 10 μl | 1× |
| Podkład do przodu (10 μM) | 0,5 μl | 0,2-0,25 μM 1* |
| Odwrócony podkład (10μM) | 0,5 μl | 0,2-0,25 μM 1* |
| Szablon (RNA) | Xμl | 0,1 pg-1 μg |
| Wolne od RNazddH2O | (9-X) μl | |
| Maksymalna głośność | 20 μl |
1*: Zwykle końcowe stężenie podkładu wynosi 0,2-0,25 μM, aby uzyskać lepsze wyniki.Gdy wydajność reakcji jest słaba, stężenie podkładu można regulować w zakresie 0,1-0,5 μM.
Uwaga: Forward Primer i Reverse Primer są specyficznymi starterami dla genu docelowego;System 50 μl, należy zapoznać się z systemem 20 μl, aby proporcjonalnie dostosować dozowanie odczynnika.
C: ustawienie programu reakcji RT-PCR
2. Zapoznaj się z ustawieniami programu reakcji RT-PCR (Tabela 2), aby ustawić temperaturę i czas reakcji.
Uwaga: W celu zapewnienia aktywności 2×RT-PCR EasyTM Mix i poprawy wydajności amplifikacji, najlepiej przygotować system reakcyjny RT-PCR po ustawieniu programu aparatu PCR, aby program reakcji można było wprowadzić natychmiast po system jest przygotowany.
Formularz 2: Ustawienie systemu reakcji RT-PCR
| Krok | Temperatura | Czas | Cykle | Zawartość |
| 1 | 42℃ | 10-30 minut | 1 | RT |
| 2 | 94℃ | 5 minut | 1 | Predenaturacja |
| 3 | 94℃ | 10sek | 30-40 | Denaturacja |
| 4 | 55-65 ℃ | 20sek | Wyżarzanie | |
| 5 | 72℃ | Xmin (2kb/min) | Rozbudowa | |
| 6 | 72℃ | 5 minut | 1 | Ostateczne przedłużenie |
Uwaga: Powyższa procedura ma jedynie charakter poglądowy.Rzeczywiste warunki reakcji różnią się w zależności od warunków strukturalnych matrycy, starterów itp. W przypadku matryc RNA o złożonych strukturach drugorzędowych zaleca się, aby temperatura reakcji dla pierwszego etapu odwrotnej transkrypcji wynosiła 50°C.W konkretnej operacji konieczne jest zaprojektowanie optymalnych warunków reakcji, w tym temperatury hybrydyzacji, czasu wydłużania itp. zgodnie z określonymi warunkami wielkości docelowego fragmentu, sekwencji zasad amplifikowanego fragmentu oraz zawartości GC i długości podkład.
Schemat działania RT-PCR
Foregene odwrotna transkryptaza
Odwrotna transkryptaza Foregene może zapewnić wysoce wydajną i specyficzną reakcję odwrotnej transkrypcji.Odwrotna transkryptaza wykazuje wysokie powinowactwo i nadal utrzymuje dobrą aktywność odwrotnej transkrypcji w temperaturze reakcji 50°C.Może dobrze odwrócić transkrypcję RNA o złożonej strukturze drugorzędowej, z którą inne odwrotne transkryptazy nie mogą sobie poradzić.Odwrotna transkryptaza Foregene ma wysoką czułość i ma zastosowanie w szerokim zakresie ilości RNA (0,1pg≤RNA≤1μg).
Foregene HotStar Taq polimeraza DNA
Zapewnia wysoce specyficzną amplifikację PCR.W trakcie odwrotnej transkrypcji polimeraza DNA jest całkowicie nieskuteczna i nie utrudnia reakcji odwrotnej transkrypcji.Po zakończeniu programu reakcji PCR, podgrzaniu do 94°C, polimeraza DNA jest aktywowana, a odwrotna transkryptaza jest inaktywowana.Proces gorącego startu eliminuje powstawanie nieswoistych starterów hybrydyzujących i dimerów starterów w pierwszym cyklu, zapewniając wysoką specyficzność i niezawodność amplifikacji PCR.
Ostrożność:(Przed użyciem zestawu należy uważnie przeczytać środki ostrożności)
- Odczynniki powinny unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania, w przeciwnym razie działanie odczynników zmniejszy się lub stanie się nieważne.
- Zaleca się stosowanie ekstrakcji świeżej próbki lub matrycowego RNA przechowywanego w temperaturze -80℃ (RNA powinno unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania).
- Aby uniknąć skażenia RNazami, działanie eksperymentu należy przeprowadzić w przestrzeni wolnej od RNaz;używane końcówki do pipet i probówki do PCR muszą być wolne od RNaz;należy nosić jednorazowe rękawiczki i maski.
- Ten zestaw musi być używany z określonymi starterami do eksperymentów.Proszę wybrać specyficzne startery dla genu do amplifikacji zgodnie z potrzebami eksperymentu.
- Przed użyciem umieść 2× RT-PCR EasyTMMieszaj na lodzie do całkowitego stopienia, trzep i dobrze wymieszaj przed użyciem;przygotowanie systemu powinno odbywać się w łaźni lodowej, aby poprawić działanie zestawu i specyficzność amplifikacji PCR.
Zdecydowanie zaleca się, aby użytkownicy uważnie przeczytali instrukcję przed użyciem tego zestawu.Łatwy RT-qPCRTMII(One Step)-Taqman jest prosty, wygodny i szybki w obsłudze.Instrukcja obsługi zapewnia prawidłowe użytkowanie całego zestawu.Przed użyciem należy przygotować niezbędne materiały i sprzęt doświadczalny.
Łatwy RT-qPCRTM(Jeden krok)-Taqman:(1pg-100ng całkowitego RNA)/system 20μl
-Przyrząd do ilościowej amplifikacji fluorescencyjnej PCR
- Mikropipeta i końcówka wolna od RNaz
- kąpiel lodowa
- Szablon RNA
- startery PCR specyficzne dla genów
- Ten produkt jest przeznaczony wyłącznie do badań naukowych, nie należy go używać w medycynie, medycynie klinicznej, żywności i kosmetykach.
- Podczas używania chemikaliów należy nosić odpowiednią odzież laboratoryjną, rękawice, okulary ochronne itp.
Poniżej znajduje się analiza problemów, które można napotkać w praktycznym użyciu zestawów serii RT-PCR Easy i mam nadzieję, że będzie ona pomocna w Twoim eksperymencie.Ponadto w przypadku innych problemów eksperymentalnych lub technicznych, innych niż instrukcje obsługi i problemów, oferujemy dedykowane wsparcie techniczne, które może Ci pomóc.W razie potrzeby prosimy o kontakt: 028-83360257 lub e-mail:Tech@foregene.com.
1. Matryca RNA jest zdegradowana
Zalecenia: Do ekstrakcji i użycia RNA o wysokiej jakości i czystości należy używać świeżych próbek (seria Foregene Total RNA Isolation Kit jest zalecana do
ekstrahować i oczyszczać RNA);RNA przechowywane w temperaturze -80 ℃ powinno unikać wielokrotnego zamrażania i
rozmrażanie.
2. RNA zawiera inhibitory
Zalecenie: Inhibitory odwrotnej transkrypcji zazwyczaj obejmują SDS, sól guanidyny, EDTA itp. Zaleca się oczyszczenie precypitatu RNA 70% etanolem w celu usunięcia inhibitora;lub użyj serii Foregene Total RNA Isolation Kit do ekstrakcji i oczyszczania RNA.
3. Problemy z projektowaniem podkładów
Zalecenie: Zgodnie z zasadą projektowania podkładu przeprojektować podkład do kontroli.
1. Zanieczyszczenie genomowym DNA w RNA.
Zalecenie: Do leczenia należy użyć DNazy I klasy do amplifikacji i przygotować kontrolę bez odwrotnej transkrypcji w celu wykrycia zanieczyszczenia DNA.
2. Mg2+stężenie nie jest odpowiednie.
Zalecenie: Stężenie Mg2+ w dostarczanej przez nas Mieszance wynosi 3,5 mM.Jednak w przypadku niektórych specjalnych starterów i matryc może być wymagane wyższe stężenie Mg2+, więc MgCl2 można dodać bezpośrednio w celu optymalizacji Mg2+stężenie.Zaleca się każdorazowe dodanie 0,5 mM Mg2+ w celu optymalizacji.
3. Temperatura wygrzewania PCR jest zbyt niska.
Sugestia: Wykonaj gradientowy PCR dla starterów i wybierz odpowiednią temperaturę hybrydyzacji.
4. Produkt PCR jest za długi.
Zalecenie: Długość fluorescencyjnego ilościowego produktu PCR wynosi korzystnie 100-300 pz.
5. Następuje degradacja startera, a degradacja startera spowoduje pojawienie się niespecyficznej amplifikacji.
Sugestia: Użyj elektroforezy SDS-PAGE, aby wykryć, czy startery uległy degradacji i zastąp nowymi starterami do eksperymentów.
6. System PCR jest nieprawidłowy lub system jest za mały.
Sugestia: Zbyt mały system reakcji PCR spowoduje zmniejszenie dokładności wykrywania.Najlepiej przeprowadzić doświadczenie ponownie, stosując układ reakcyjny zalecany przez aparat ilościowy do PCR.
7. Za dużo cykli PCR.
Zalecenie: odpowiednio zmniejszyć liczbę cykli PCR.
1. W szablonie RNA znajduje się duża liczba inhibitorów enzymów.Sugestia: Oczyść szablon lub zmniejsz ilość używanego szablonu.
2. Warunki amplifikacji PCR nie są odpowiednie, sekwencja lub stężenie startera jest niewłaściwe.
Sugestia: potwierdź poprawność sekwencji startera i starter nie został zdegradowany;jeśli sygnał amplifikacji nie jest dobry, należy spróbować obniżyć temperaturę wyżarzania i odpowiednio dostosować stężenie startera.
3. Ilość szablonu jest za mała lub za duża.
Zalecenie: Wykonaj rozcieńczenie gradientu linearyzacji matrycy i wybierz stężenie matrycy z najlepszym efektem PCR do fluorescencyjnych doświadczeń ilościowych.
1. Zanieczyszczenie odczynnika powstałe podczas pracy.
Zalecenie: Wymień na nowe odczynniki do eksperymentów RT-PCR.
2. Zanieczyszczenie wystąpiło podczas przygotowywania układu reakcyjnego PCR.Zalecenie: Podczas pracy należy podjąć niezbędne środki ochronne, takie jak: noszenie rękawiczek lateksowych, używanie końcówki do pipety z filtrem itp.
3. Startery ulegają degradacji, a degradacja starterów prowadzi do niespecyficznej amplifikacji.
Sugestia: Użyj elektroforezy SDS-PAGE, aby wykryć, czy startery uległy degradacji i zastąp je nowymi starterami do eksperymentów RT-PCR.
1. Przyrząd działa nieprawidłowo.
Sugestia: Mogą wystąpić błędy pomiędzy każdym otworem PCR maszyny do PCR, co skutkuje słabą odtwarzalnością podczas kontroli temperatury lub wykrywania.
Proszę przeprowadzić test zgodnie z instrukcją odpowiedniego przyrządu.
2. Czystość próbki nie jest dobra.
Zalecenie: Zanieczyszczone próbki spowodują słabą powtarzalność eksperymentu, w tym czystość matrycy i starterów.Najlepiej jest ponownie oczyścić matrycę, a startery najlepiej oczyścić metodą SDS-PAGE.
3. Zbyt długi czas przygotowania i przechowywania systemu PCR.
Sugestia: Użyj systemu RT-PCR do eksperymentów PCR natychmiast po przygotowaniu i nie zostawiaj go zbyt długo;zaleca się uruchomienie programu PCR przed przystąpieniem do przygotowania systemu RT-PCR.
4. Warunki amplifikacji PCR nie są odpowiednie, a sekwencja lub stężenie startera jest niewłaściwe.
Sugestia: potwierdź poprawność sekwencji startera i starter nie został zdegradowany;gdy sygnał amplifikacji nie jest dobry, należy spróbować wyregulować temperaturę wyżarzania i odpowiednio wyregulować stężenie startera.
Osoba kontaktowa: Maggie
Tel: +8615281067355
